Dois métodos para clivar peptídeos de resinas-de fase sólida
Um método para clivar polipeptídeos de resinas-de fase sólida
Fmoc de fase sólida Depois de sintetizar quimicamente os peptídeos, existem muitos métodos de clivagem. Agora apresentaremos dois tipos básicos comumente usados por todos.
1. Método de ácido forte (TFA comumente usado)
Coloque a resina seca em um frasco agitador e adicione a quantidade apropriada de eliminador ( Eliminadores) Reagente de clivagem ácido trifluoroacético (TFA), 10-25ml/g Resina, cubra e agite intermitentemente em temperatura ambiente. Filtre a resina com TFA novo. Lave a resina 2 a 3 vezes, combine o filtrado e adicione gota a gota 8 a 10 vezes o volume de éter glacial. Às vezes, parte dele pode ser removida do TFA por vapor. Foi obtido um precipitado peptídico bruto. O éter dietílico pode ser resfriado com gelo para melhorar a eficiência da precipitação. Finalmente, colete o peptídeo bruto precipitado.
Resina aplicável:resina king ou resina Rink Amide
2. Método de ácido fraco (TFA diluído ou ácido acético)
1% de AGT:
1 g A resina suspensa-de polipeptídeo foi adicionada a uma solução contendo 1% de TFA. O frasco de agitação de vidro com solução de diclorometano foi selado e agitado por 2 minutos. Use nitrogênio para despejar o filtrado em outro frasco de agitação de metanol novo contendo 10% de piridina. Repita a operação acima 10 vezes. Use 30 ml de DCM, 30 ml de MeOH. Lave os restantes peptídeos protegidos na resina três vezes sequencialmente. por TLC ou HPLC Verifique os resíduos de limpeza. Combine todo o filtrado e evapore o solvente sob pressão reduzida para deixar 5% do volume. adicione 40 ml de água e-resfrie a mistura com gelo para ajudar na precipitação. Após a filtração, lave o produto três vezes com água limpa e coloque-o em uma caixa de secagem a vácuo para uso. KOH ou P2O5 Deixe secar.
ácido acético diluído:
use AcOH/TFE/DCM (2:2:6) Trate os peptídeos pendurados na resina com solução de corte por 2 horas, filtre a resina e lave a resina três vezes com solução de corte. Adicione 15 vezes o volume de n-hexano ao filtrado misturado e evapore rotativamente para remover o excesso de ácido acético. Os métodos de recuperação de peptídeos são detalhados abaixo.
Resina aplicável:2- Resina CTC