Reagentes para condensação de peptídeos

Atualmente, na síntese de peptídeos, os métodos de ativação de carboxila são usados ​​principalmente para completar as reações peptídicas. Os primeiros métodos utilizados foram para ativar aminoácidos em cloretos ácidos, azidas, anidridos simétricos e anidridos ácidos mistos. Porém, devido à existência de racemização de aminoácidos nestas condições, ao perigo dos reagentes de reação e à complexidade de preparação, eles foram gradativamente substituídos por reagentes de condensação posteriores, que podem ser divididos em dois tipos de acordo com suas estruturas: Os principais reagentes de condensação são: tipo Carbodiimida, tipo sal de ônio (Urônio).

Inclui principalmente: espera DCC, DIC, EDC.HCl. usar DCC realizar a reação, devido ao DCU, existir DMF Tem muito pouca solubilidade e produz precipitado branco, por isso geralmente não é usado na síntese-de fase sólida. Porém, por ser barato, pode ser removido por filtração na síntese-de fase líquida e ainda é amplamente utilizado. EDC.HCl Devido à sua solubilidade em água, é frequentemente utilizado na conexão de polipeptídeos e proteínas, e também tem bastante sucesso. Porém, uma das maiores desvantagens deste tipo de reagente de condensação é que se usado sozinho, haverá mais reações colaterais. No entanto, pesquisas mostram que se HOBt e HOAt forem adicionados durante o processo de ativação. Esses reagentes podem controlar reações colaterais em uma faixa muito baixa. O mecanismo de reação é o seguinte:

Figura 2 Mecanismo de reação de ativação DIC

Os reagentes de condensação do tipo sal de ônio têm alta reatividade e velocidade rápida, e agora são amplamente utilizados, incluindo principalmente: HBTU, TBTU, HATU, PyBOP wait. Durante a utilização deste reagente é necessário adicionar uma base orgânica, como diisopropiletilamina (DIEA), N- Metilmorfolina (NMM). O aminoácido só pode ser ativado após a adição deste reagente. O mecanismo de reação é o seguinte:

As resinas usadas na síntese-de peptídeos em fase sólida são geralmente materiais de poliestireno-divinilbenzeno, com tamanhos variando de 75 a 150 μm. O grau de reticulação-está entre 1-2%, e a maioria dos usados agora são 1%, porque neste grau de reticulação-, a resina DMF, DCM tem boas propriedades de intumescimento e tem uma estrutura de rede tri-dimensional, e as moléculas dos reagentes podem se mover livremente dentro da resina. A parte mais crítica da resina é o braço de conexão, que está conectado à resina em uma extremidade e serve como local de reação na outra extremidade. As resinas atualmente amplamente utilizadas são: PAM, MBHA, Wang, 2-Cl-Trt, Rink-Amide-MBHA wait. no PAM, o MBHA é usado na estratégia BOC, porque é muito estável ao ácido, precisa ser HF, TFMSA. Só pode ser cortado em condições de ácido forte.

Após a conclusão da síntese-de peptídeo em fase sólida, um reagente de clivagem adequado deve ser selecionado para clivar o peptídeo da resina e, em seguida, precipitar com éter glacial, coletar o precipitado por centrifugação e separar, purificar e liofilizar-por HPLC para obter o produto peptídico final.

Devido às diferentes resinas e sequências de aminoácidos selecionadas, os métodos de clivagem selecionados durante a clivagem não são exatamente os mesmos. Geralmente, as condições de clivagem são selecionadas sob condições ácidas. Para PAM, resina MBHA, corte HF geralmente usado, p-cresol, p-mercaptofenol, anisol e outros reagentes precisam ser adicionados durante o processo de corte. E para Wang, Rink-Amida, Resina Trt, corte TFA geralmente usado, adicione etilenoglicol, sulfeto de anisol, água, triisopropilsilano, fenol, etc.

Esses reagentes aditivos são usados ​​principalmente como reagentes de captura de carbocátions. O objetivo é capturar o carbocátion gerado durante a reação de clivagem e reduzir as reações colaterais causadas pelo ataque desses íons carbocátions em algumas cadeias laterais de aminoácidos. Os aminoácidos com maior probabilidade de produzir reações colaterais incluem: Trp, Tyr. A dosagem do reagente de corte é geralmente de 10-15 ml/g de resina.

Razões de corte comumente usadas: HF/p-cresol/p-tiocresol(90/5/5), TFA/TIS/EDT/H2O(94/1/2,5/2,5), A reação é geralmente realizada à temperatura ambiente 2 h-4h.

Na síntese-de peptídeos em fase sólida, frequentemente encontramos o problema de falha na síntese de peptídeos ou baixa eficiência de síntese. O principal motivo é devido à sequência peptídica, porque algumas sequências peptídicas são formadas na resina. -O dobramento altera as propriedades de intumescimento da resina e também pode enterrar os sítios ativos da reação na resina, dificultando o prosseguimento da reação. Os relatórios atuais indicam que

Use solventes mistos, DMSO/DMF, solução 6N Guanidina/DMF

Aumente a temperatura de reação ou use o método de microondas

Use sais caotrópicos, LiCl, NaClO4, espere.

Use resina PEG-PS com melhores propriedades de intumescimento, enquanto reduz a carga de resina (0,05-0,2 mmol/g)

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