Dissolução de polipeptídeos
Cada aminoácido possui propriedades químicas inerentes e a solubilidade de um peptídeo depende de sua sequência e modificações. Recomendamos tomar uma pequena quantidade do peptídeo para testes de solubilidade antes de dissolver todos os peptídeos.
A dissolução de peptídeos é uma etapa muito importante. A solubilização inadequada pode resultar em perda de peptídeos ou falha experimental. A solubilidade dos peptídeos depende principalmente da sequência do peptídeo, portanto preste atenção ao projetar o peptídeo. Recomenda-se que a sequência peptídica contenha 20% de resíduos carregados para aumentar sua solubilidade.
Antes do uso, os clientes podem seguir os três princípios básicos a seguir para escolher um solvente adequado para dissolver o peptídeo.
Primeiro, o solvente escolhido deve ser capaz de dissolver completamente o peptídeo; Segundo, o solvente escolhido deve ser compatível com as condições experimentais; Finalmente, o solvente escolhido não deve reagir ou degradar o péptido.
Contanto que a quantidade de peptídeo permita, você pode primeiro dissolver uma pequena porção do peptídeo e depois dissolver toda a amostra. Se precisar recuperar o peptídeo de um solvente, você pode escolher um solvente inicial que facilite a remoção após a liofilização.
As sugestões a seguir podem ajudá-lo a dissolver peptídeos:
Peptídeos com menos de 5 aminoácidos são geralmente solúveis em soluções aquosas, exceto aminoácidos fortemente hidrofóbicos (W, I, L, F, M, V, Y).
If the charged amino acids are evenly distributed throughout the sequence, then contains >25% aminoácidos carregados (E, D, K, R, H) de peptídeos hidrofílicos e contendo<25%Peptides with hydrophobic amino acids are generally soluble in aqueous solutions. The purification system for peptides is generally 0.1% TFA/Water and 0.1% TFA/ ACN. Therefore, if the peptide is dissolved in a buffer with no or very weak buffering capacity, the result may be an acidic peptide solution. When using other methods to dissolve peptides, be sure to use a solvent that is pH The value is nearly neutral. acidic peptide (E+D The number of residues is more than K+R+H number of residues) and basic peptides (K+R+H The number of residues is more than E+D number of residues) in neutral pH value conditions than in acidic pH value is easier to dissolve.
For hydrophobic amino acid content is 50% ～75%peptide, even if the sequence contains >25% de aminoácidos carregados também podem ser insolúveis ou parcialmente solúveis em água. É melhor primeiro dissolver o peptídeo em uma quantidade mínima de um solvente orgânico forte, como DMF, ACN, álcool isopropílico, etanol, ácido acético, 4-8 M GdnHCl, ureia ou DMSO (não na sequência C, W, M) e outros solventes orgânicos semelhantes. É melhor adicionar lentamente o solvente orgânico que dissolve o peptídeo na solução aquosa, gota a gota. Se a solução ficar turva, pode ter atingido o limite de solubilidade e não adianta continuar a dissolvê-la. Ressalta-se que o solvente inicialmente selecionado deverá ser compatível com o sistema experimental.
Hydrophobic amino acid content >75% Os peptídeos fortemente hidrofóbicos geralmente também são insolúveis em soluções aquosas. Esses peptídeos também devem ser tratados primeiro com solventes orgânicos fortes (por exemplo, TFA, ácido fórmico) que se dissolvem e também podem precipitar se adicionados a uma solução aquosa. A solução peptídica final pode exigir altas concentrações de solventes orgânicos para desnaturá-la, e os solventes orgânicos geralmente não são usados para estudos de função biológica em células vivas.
S, T, E, D, K, R, H, N, Q, Y High content (>75%) As sequências polipeptídicas tendem a formar redes redundantes de ligações de hidrogênio intermoleculares e formam facilmente géis em soluções aquosas concentradas. Tais peptídeos podem ser solubilizados conforme descrito na etapa 3. Para reduzir possíveis problemas durante a dissolução, recomenda-se que os clientes prestem mais atenção ao desenho e à sequência para melhorar a solubilidade do peptídeo.